ELISA實(shí)驗(yàn)老失�。窟@樣做，你也能輕松得到漂亮數(shù)據(jù)！

ELISA實(shí)驗(yàn)，真的沒(méi)有表面看起來(lái)的那么容易做，不然也不會(huì)那么多人失敗，到處求救了……所以，今天長(zhǎng)沙實(shí)驗(yàn)外包公司慧登生物實(shí)驗(yàn)室就以Proteintech預(yù)包被ELISA試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)為例，簡(jiǎn)單說(shuō)說(shuō)ELISA實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中哪些我們要格外注意吧！

ELISA實(shí)驗(yàn)注意點(diǎn)1、酶標(biāo)板條拆分要當(dāng)心

除了個(gè)人防護(hù)和確保工作臺(tái)面干凈整潔外，酶標(biāo)板條拆分時(shí)動(dòng)作一定要輕柔，避免用力過(guò)猛導(dǎo)致板條變形或孔內(nèi)液體濺出，尤其注意，拆卸后觀察板條是否有裂痕或變形，損壞的板條不可繼續(xù)使用。

長(zhǎng)沙實(shí)驗(yàn)外包公司慧登生物實(shí)驗(yàn)室提醒大家，記得標(biāo)記拆卸板條的信息（如實(shí)驗(yàn)編號(hào)、日期、樣本類型）。未使用的板條放回原鋁箔袋，加入干燥劑后密封，避光防潮于4℃保存，并于⼀周之內(nèi)⽤完，要注意，不同批號(hào)或?qū)嶒?yàn)的板條分開(kāi)存放，避免誤用。

ELISA實(shí)驗(yàn)注意點(diǎn)2、做到精準(zhǔn)加樣

在進(jìn)⾏標(biāo)準(zhǔn)品、樣本以及不同試劑加樣時(shí)，一定要更換槍頭，避免接觸微孔板的內(nèi)表⾯，而且，不同的試劑，使⽤不同的加樣槽。加樣后若有氣泡，用干凈槍頭輕輕戳破，以免影響OD值讀數(shù)。

長(zhǎng)沙實(shí)驗(yàn)外包公司慧登生物實(shí)驗(yàn)室建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣本都做復(fù)孔，盡量避免實(shí)驗(yàn)誤差，確保上樣不間斷，5-10min完成加樣。

ELISA實(shí)驗(yàn)注意點(diǎn)3、孵育時(shí)控制好時(shí)間與溫度

長(zhǎng)沙實(shí)驗(yàn)外包公司慧登生物實(shí)驗(yàn)室推薦可以選擇37℃孵育2h，但高背景時(shí)可嘗試室溫孵育或者減少孵育時(shí)間。長(zhǎng)時(shí)間孵育的話，記得覆蓋好封板膜，這樣能有效防止液體蒸發(fā)導(dǎo)致濃度變化，想縮短孵育時(shí)間的話，可以用水平搖床低速震蕩（如400-500 rpm）促進(jìn)抗原抗體結(jié)合。

ELISA實(shí)驗(yàn)注意點(diǎn)4、洗滌口訣不要忘

長(zhǎng)沙實(shí)驗(yàn)外包公司慧登生物實(shí)驗(yàn)室提醒大家，記住口訣：一浸、二倒、三控干！一浸：洗滌液（1×）洗滌板條，每孔350-400µL，用手輕磕板架四周，每邊輕磕3-4下，棄掉洗滌液。二倒：快速翻轉(zhuǎn)板子，甩凈液體（可在吸水紙上輕拍2-3次）。三控干：倒扣板子于吸水紙上，停留10秒吸殘留液。

重復(fù)此步驟4次，但是要注意，避免異物進(jìn)⼊板孔，保持板條⼲燥。

ELISA實(shí)驗(yàn)注意點(diǎn)5、顯色與終止：把握時(shí)機(jī)

避光操作：TMB顯色液遇光易降解，需保持顯⾊底物始終處于避光狀態(tài)，顯⾊底物在加樣前應(yīng)是⽆⾊透明的，長(zhǎng)沙實(shí)驗(yàn)外包公司慧登生物實(shí)驗(yàn)室提醒大家，如有變⾊，請(qǐng)勿使⽤。

顯色觀察：陽(yáng)性孔應(yīng)呈現(xiàn)梯度藍(lán)色（標(biāo)準(zhǔn)曲線孔），若顏色過(guò)深立即終止，如果顏⾊偏淺，可適當(dāng)延⻓顯⾊時(shí)間，不超過(guò)30 min；

終止順序：與加樣順序一致！先加顯色液的孔先加終止液，避免時(shí)間差導(dǎo)致顯色不均。長(zhǎng)沙實(shí)驗(yàn)外包公司慧登生物實(shí)驗(yàn)室提醒大家注意安全，眼睛和⽪膚避免接觸終⽌液。

板底清潔：用無(wú)塵紙擦干板底液體或指紋，避免散射光干擾。

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