流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題答疑！

眾所周知，流式細(xì)胞術(shù)有著能夠快速測(cè)定細(xì)胞懸液中單個(gè)細(xì)胞的生物學(xué)性質(zhì)，并可以對(duì)特定的細(xì)胞進(jìn)行分選收集，所以廣泛用于細(xì)胞生物學(xué)，免疫學(xué)，遺傳學(xué)，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。但是對(duì)于新手來(lái)說(shuō)，初次做這個(gè)流式實(shí)驗(yàn)會(huì)遇到諸多問(wèn)題，今天就讓長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包公司慧登生物實(shí)驗(yàn)室來(lái)給大家說(shuō)說(shuō)吧~

1、樣品處理需要注意哪些？

長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包公司慧登生物實(shí)驗(yàn)室提醒，未固定的樣本應(yīng)立即實(shí)驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇最佳固定方法，避免因固定劑造成檢測(cè)結(jié)果不穩(wěn)定，新鮮組織標(biāo)本應(yīng)及時(shí)處理保存，以免在室溫下放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，導(dǎo)致組織壞死及細(xì)胞自溶，從而影響檢測(cè)結(jié)果。

2、如何確定樣品是否需要破膜？

可通過(guò)蛋白信息數(shù)據(jù)庫(kù)或其他文獻(xiàn)查詢(xún)蛋白在細(xì)胞/正常組織/癌變組織中的表達(dá)情況，以確定后續(xù)實(shí)驗(yàn)中該選取什么樣品（細(xì)胞）來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以及是否使用破膜劑/破核膜劑來(lái)處理樣品（細(xì)胞）。

3、流式染色時(shí)間和溫度如何選擇？ 

流式染色是抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)，該過(guò)程結(jié)合非�？欤�而且非常牢固，但染色過(guò)程要盡量讓所有抗原都能結(jié)合抗體分子，所以長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包公司慧登生物實(shí)驗(yàn)室提醒，我們加入抗體時(shí)一定要混勻，一般選擇室溫染色15 min或者4℃染色30 min，染色中途混勻一次，輕彈管子（不要用槍頭吹打，這操作可能會(huì)對(duì)細(xì)胞受損，死細(xì)胞增多，導(dǎo)致非特異性結(jié)合增加）。

4、FCM檢測(cè)過(guò)程中如何調(diào)節(jié)補(bǔ)償？ 

長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包公司慧登生物實(shí)驗(yàn)室提醒，在FCM檢測(cè)過(guò)程中，如果存在多色，則必須進(jìn)行熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)補(bǔ)償首先要知道雙陰性細(xì)胞的情況，其次，必須要用單陽(yáng)和雙陰性細(xì)胞。只有在有陰性細(xì)胞作為參照的情況下，才能既不會(huì)過(guò)多又不會(huì)過(guò)少地調(diào)節(jié)補(bǔ)償。

5、細(xì)胞內(nèi)染色選用什么樣的熒光素？ 

對(duì)于胞內(nèi)染色，應(yīng)選用分子量較小的熒光素。

6、補(bǔ)償過(guò)高或增益過(guò)低導(dǎo)致無(wú)信號(hào)/熒光弱怎么辦？ 

使用陽(yáng)性對(duì)照再次設(shè)置補(bǔ)償或在合理的范圍內(nèi)提高增益以增強(qiáng)信號(hào)。

好了，關(guān)于流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題就說(shuō)這些了，如果大家還有不明白的或者是需要實(shí)驗(yàn)協(xié)助指導(dǎo)的，可以直接咨詢(xún)長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包公司慧登生物實(shí)驗(yàn)室客服老師哦！